Gràcies per visitar Nature.com. La versió del navegador que esteu utilitzant té compatibilitat limitada amb CSS. Per obtenir els millors resultats, us recomanem que utilitzeu un navegador més nou (o que desactiveu el mode de compatibilitat a l'Internet Explorer). Mentrestant, per garantir que continuï la compatibilitat, mostrarem el lloc web sense estils ni JavaScript.
L'establiment de models animals de canvi mòdic (MC) és una base important per a l'estudi del MC. Cinquanta-quatre conills blancs de Nova Zelanda es van dividir en el grup d'operació simulada, el grup d'implantació muscular (grup ME) i el grup d'implantació del nucli pulpos (grup NPE). En el grup NPE, el disc intervertebral es va exposar mitjançant un abordatge quirúrgic lumbar anterolateral i es va utilitzar una agulla per punxar el cos vertebral L5 prop de la placa terminal. Es va extreure NP del disc intervertebral L1/2 amb una xeringa i es va injectar-hi. Perforació d'un forat a l'os subcondral. Els procediments quirúrgics i els mètodes de perforació en el grup d'implantació muscular i el grup d'operació simulada van ser els mateixos que els del grup d'implantació de NP. En el grup ME, es va col·locar un tros de múscul al forat, mentre que en el grup d'operació simulada no es va col·locar res al forat. Després de l'operació, es van realitzar ressonàncies magnètiques i proves de biologia molecular. El senyal en el grup NPE va canviar, però no hi va haver cap canvi de senyal evident en el grup d'operació simulada i el grup ME. L'observació histològica va mostrar que es va observar una proliferació tissular anormal al lloc d'implantació, i l'expressió d'IL-4, IL-17 i IFN-γ va augmentar en el grup NPE. La implantació de NP a l'os subcondral pot formar un model animal de MC.
Els canvis mòdics (CM) són lesions de les plaques terminals vertebrals i la medul·la òssia adjacent visibles en ressonància magnètica (RM). Són força comuns en individus amb símptomes associats1. Molts estudis han emfatitzat la importància del CM a causa de la seva associació amb el dolor lumbar (DL)2,3. de Roos et al.4 i Modic et al.5 van descriure de manera independent tres tipus diferents d'anomalies del senyal subcondral a la medul·la òssia vertebral. Els canvis mòdics de tipus I són hipointensos a les seqüències ponderades en T1 (T1W) i hiperintensos a les seqüències ponderades en T2 (T2W). Aquesta lesió revela plaques terminals de fissures i teixit de granulació vascular adjacent a la medul·la òssia. Els canvis mòdics de tipus II mostren un senyal alt tant a les seqüències T1W com a les T2W. En aquest tipus de lesió, es pot trobar destrucció de les plaques terminals, així com reemplaçament histològic greixós de la medul·la òssia adjacent. Els canvis mòdics de tipus III mostren un senyal baix a les seqüències T1W i T2W. S'han observat lesions escleròtiques corresponents a les plaques terminals6. La MC es considera una malaltia patològica de la columna vertebral i està estretament associada amb moltes malalties degeneratives de la columna vertebral7,8,9.
Tenint en compte les dades disponibles, diversos estudis han proporcionat informació detallada sobre l'etiologia i els mecanismes patològics de la MC. Albert et al. van suggerir que la MC pot ser causada per una hèrnia discal8. Hu et al. van atribuir la MC a una degeneració discal greu10. Kroc va proposar el concepte de "ruptura interna del disc", que afirma que un traumatisme discal repetitiu pot provocar microesquinçaments a la placa terminal. Després de la formació de fissures, la destrucció de la placa terminal pel nucli pulpos (NP) pot desencadenar una resposta autoimmune, que condueix encara més al desenvolupament de la MC11. Ma et al. van compartir una opinió similar i van informar que l'autoimmunitat induïda per NP juga un paper clau en la patogènesi de la MC12.
Les cèl·lules del sistema immunitari, especialment els limfòcits T auxiliars CD4+, tenen un paper crític en la patogènesi de l'autoimmunitat13. El subconjunt Th17 recentment descobert produeix la citocina proinflamatòria IL-17, promou l'expressió de quimiocines i estimula els limfòcits T en òrgans danyats per produir IFN-γ14. Els limfòcits Th2 també tenen un paper únic en la patogènesi de les respostes immunitàries. L'expressió d'IL-4 com a cèl·lula Th2 representativa pot conduir a greus conseqüències immunopatològiques15.
Tot i que s'han dut a terme molts estudis clínics sobre la MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, encara hi ha una manca de models experimentals animals adequats que puguin imitar el procés de MC que es produeix amb freqüència en humans i que es puguin utilitzar per investigar l'etiologia o nous tractaments com la teràpia dirigida. Fins ara, només s'han descrit uns quants models animals de MC per estudiar els mecanismes patològics subjacents.
Basant-nos en la teoria autoimmunitària proposada per Albert i Ma, aquest estudi va establir un model de MC de conill simple i reproduïble mitjançant l'autotransplantament de nanopartícules (NP) a prop de la placa terminal vertebral perforada. Altres objectius són observar les característiques histològiques dels models animals i avaluar els mecanismes específics de les NP en el desenvolupament de la MC. Per a això, utilitzem tècniques com la biologia molecular, la ressonància magnètica i estudis histològics per estudiar la progressió de la MC.
Dos conills van morir d'hemorràgia durant la cirurgia i quatre conills van morir durant l'anestèsia durant la ressonància magnètica. Els 48 conills restants van sobreviure i no van mostrar signes conductuals ni neurològics després de la cirurgia.
La ressonància magnètica mostra que la intensitat del senyal del teixit incrustat en diferents forats és diferent. La intensitat del senyal del cos vertebral L5 en el grup NPE va canviar gradualment a les 12, 16 i 20 setmanes després de la inserció (la seqüència T1W va mostrar un senyal baix i la seqüència T2W va mostrar un senyal mixt més un senyal baix) (Fig. 1C), mentre que l'aspecte de la ressonància magnètica dels altres dos grups de parts incrustades es va mantenir relativament estable durant el mateix període (Fig. 1A, B).
(A) Ressonàncies magnètiques seqüencials representatives de la columna lumbar del conill en 3 punts temporals. No es van trobar anomalies de senyal a les imatges del grup d'operació simulada. (B) Les característiques del senyal del cos vertebral en el grup ME són similars a les del grup d'operació simulada, i no s'observa cap canvi significatiu de senyal al lloc d'incrustació al llarg del temps. (C) En el grup NPE, el senyal baix és clarament visible a la seqüència T1W, i el senyal mixt i el senyal baix són clarament visibles a la seqüència T2W. Des del període de 12 setmanes fins al període de 20 setmanes, els senyals alts esporàdics que envolten els senyals baixos a la seqüència T2W disminueixen.
Es pot observar una hiperplàsia òssia òbvia al lloc d'implantació del cos vertebral en el grup NPE, i la hiperplàsia òssia es produeix més ràpidament de 12 a 20 setmanes (Fig. 2C) en comparació amb el grup NPE, no s'observa cap canvi significatiu en els cossos vertebrals modelats; grup Sham i grup ME (Fig. 2C) 2A,B).
(A) La superfície del cos vertebral a la porció implantada és molt llisa, el forat es cura bé i no hi ha hiperplàsia al cos vertebral. (B) La forma del lloc implantat al grup ME és similar a la del grup d'operació simulada, i no hi ha cap canvi evident en l'aspecte del lloc implantat al llarg del temps. (C) Es va produir hiperplàsia òssia al lloc implantat al grup NPE. La hiperplàsia òssia va augmentar ràpidament i fins i tot es va estendre a través del disc intervertebral fins al cos vertebral contralateral.
L'anàlisi histològica proporciona informació més detallada sobre la formació òssia. La figura 3 mostra les fotografies de les seccions postoperatòries tenyides amb H&E. En el grup d'operació simulada, els condròcits estaven ben disposats i no es va detectar proliferació cel·lular (Fig. 3A). La situació en el grup ME va ser similar a la del grup d'operació simulada (Fig. 3B). Tanmateix, en el grup NPE, es va observar un gran nombre de condròcits i proliferació de cèl·lules similars a NP al lloc d'implantació (Fig. 3C);
(A) Es poden veure trabècules prop de la placa terminal, els condròcits estan ordenadament disposats amb una mida i forma cel·lular uniformes i sense proliferació (40 vegades). (B) L'estat del lloc d'implantació al grup ME és similar al del grup simulat. Es poden veure trabècules i condròcits, però no hi ha una proliferació òbvia al lloc d'implantació (40 vegades). (B) Es pot observar que els condròcits i les cèl·lules semblants a NP proliferen significativament, i la forma i la mida dels condròcits són desiguals (40 vegades).
L'expressió de l'ARNm de la interleucina 4 (IL-4), l'ARNm de la interleucina 17 (IL-17) i l'ARNm de l'interferó γ (IFN-γ) es va observar tant en el grup NPE com en el grup ME. Quan es van comparar els nivells d'expressió dels gens diana, les expressions gèniques de la IL-4, la IL-17 i l'IFN-γ van augmentar significativament en el grup NPE en comparació amb les del grup ME i el grup d'operació simulada (Fig. 4) (P < 0,05). En comparació amb el grup d'operació simulada, els nivells d'expressió de la IL-4, la IL-17 i l'IFN-γ en el grup ME només van augmentar lleugerament i no van assolir un canvi estadístic (P > 0,05).
L'expressió d'ARNm d'IL-4, IL-17 i IFN-γ en el grup NPE va mostrar una tendència significativament més alta que la del grup d'operació simulada i la del grup ME (P < 0,05).
En canvi, els nivells d'expressió en el grup ME no van mostrar cap diferència significativa (P > 0,05).
L'anàlisi Western blot es va dur a terme utilitzant anticossos disponibles comercialment contra IL-4 i IL-17 per confirmar el patró d'expressió de l'ARNm alterat. Com es mostra a les figures 5A,B, en comparació amb el grup ME i el grup d'operació simulada, els nivells de proteïnes d'IL-4 i IL-17 en el grup NPE van augmentar significativament (P < 0,05). En comparació amb el grup d'operació simulada, els nivells de proteïnes d'IL-4 i IL-17 en el grup ME tampoc van assolir canvis estadísticament significatius (P > 0,05).
(A) Els nivells de proteïna d'IL-4 i IL-17 en el grup NPE van ser significativament més alts que els del grup ME i del grup placebo (P < 0,05). (B) Histograma de Western blot.
A causa del nombre limitat de mostres humanes obtingudes durant la cirurgia, els estudis clars i detallats sobre la patogènesi de la MC són una mica difícils. Vam intentar establir un model animal de MC per estudiar-ne els possibles mecanismes patològics. Al mateix temps, es va utilitzar una avaluació radiològica, una avaluació histològica i una avaluació de biologia molecular per seguir el curs de la MC induïda per autoempelt de nanopartícules. Com a resultat, el model d'implantació de nanopartícules va provocar un canvi gradual en la intensitat del senyal des de les 12 setmanes fins a les 20 setmanes (senyal baix mixt en les seqüències T1W i senyal baix en les seqüències T2W), cosa que indica canvis en els teixits, i les avaluacions histològiques i de biologia molecular van confirmar els resultats de l'estudi radiològic.
Els resultats d'aquest experiment mostren que es van produir canvis visuals i histològics al lloc de la lesió del cos vertebral en el grup NPE. Al mateix temps, es va observar l'expressió dels gens IL-4, IL-17 i IFN-γ, així com IL-4, IL-17 i IFN-γ, cosa que indica que la lesió del teixit autòleg del nucli pulpós al cos vertebral pot causar una sèrie de canvis morfològics i de senyal. És fàcil trobar que les característiques del senyal dels cossos vertebrals del model animal (senyal baix a la seqüència T1W, senyal mixt i senyal baix a la seqüència T2W) són molt similars a les de les cèl·lules vertebrals humanes, i les característiques de la ressonància magnètica també confirmen les observacions d'histologia i anatomia macroscòpica, és a dir, els canvis a les cèl·lules del cos vertebral són progressius. Tot i que la resposta inflamatòria causada per un trauma agut pot aparèixer poc després de la punció, els resultats de la ressonància magnètica van mostrar que els canvis de senyal progressivament creixents van aparèixer 12 setmanes després de la punció i van persistir fins a 20 setmanes sense cap signe de recuperació o reversió dels canvis de la ressonància magnètica. Aquests resultats suggereixen que la NP vertebral autòloga és un mètode fiable per establir una VM progressiva en conills.
Aquest model de punció requereix l'habilitat, el temps i l'esforç quirúrgic adequats. En experiments preliminars, la dissecció o l'estimulació excessiva de les estructures lligamentoses paravertebrals pot provocar la formació d'osteòfits vertebrals. Cal anar amb compte de no danyar ni irritar els discs adjacents. Com que la profunditat de penetració s'ha de controlar per obtenir resultats consistents i reproduïbles, vam fer manualment un tap tallant la beina d'una agulla de 3 mm de llarg. L'ús d'aquest tap garanteix una profunditat de perforació uniforme al cos vertebral. En experiments preliminars, tres cirurgians ortopèdics implicats en l'operació van trobar que les agulles de calibre 16 eren més fàcils de treballar que les agulles de calibre 18 o altres mètodes. Per evitar un sagnat excessiu durant la perforació, mantenir l'agulla quieta durant un temps proporcionarà un forat d'inserció més adequat, cosa que suggereix que es pot controlar un cert grau de MC d'aquesta manera.
Tot i que molts estudis s'han centrat en la MC, se sap poc sobre l'etiologia i la patogènesi de la MC25,26,27. Basant-nos en els nostres estudis previs, vam descobrir que l'autoimmunitat juga un paper clau en l'aparició i el desenvolupament de la MC12. Aquest estudi va examinar l'expressió quantitativa d'IL-4, IL-17 i IFN-γ, que són les principals vies de diferenciació de les cèl·lules CD4+ després de l'estimulació amb antígens. En el nostre estudi, en comparació amb el grup negatiu, el grup NPE tenia una expressió més alta d'IL-4, IL-17 i IFN-γ, i els nivells de proteïnes d'IL-4 i IL-17 també eren més alts.
Clínicament, l'expressió d'ARNm d'IL-17 augmenta en cèl·lules NP de pacients amb hèrnia discal28. També es van trobar nivells d'expressió augmentats d'IL-4 i IFN-γ en un model d'hèrnia discal aguda no compressiva en comparació amb controls sans29. La IL-17 juga un paper clau en la inflamació, la lesió tissular en malalties autoimmunitàries30 i millora la resposta immunitària a l'IFN-γ31. S'ha informat d'una lesió tissular mediada per IL-17 millorada en ratolins MRL/lpr32 i ratolins susceptibles a l'autoimmunitat33. La IL-4 pot inhibir l'expressió de citocines proinflamatòries (com ara IL-1β i TNFα) i l'activació dels macròfags34. Es va informar que l'expressió d'ARNm d'IL-4 era diferent en el grup NPE en comparació amb IL-17 i IFN-γ al mateix moment; L'expressió d'ARNm d'IFN-γ en el grup NPE va ser significativament més alta que en els altres grups. Per tant, la producció d'IFN-γ pot ser un mediador de la resposta inflamatòria induïda per la intercalació de NP. Els estudis han demostrat que l'IFN-γ és produït per múltiples tipus de cèl·lules, incloent-hi els limfòcits T col·laboradors de tipus 1 activats, les cèl·lules assassines naturals i els macròfags35,36, i és una citocina proinflamatòria clau que promou les respostes immunitàries37.
Aquest estudi suggereix que la resposta autoimmune pot estar implicada en l'aparició i el desenvolupament de la MC. Luoma et al. van trobar que les característiques del senyal de la MC i les nanopartícules (NP) prominents són similars a la ressonància magnètica, i ambdues mostren un senyal alt en la seqüència T2W38. S'ha confirmat que algunes citocines estan estretament associades amb l'aparició de MC, com ara la IL-139. Ma et al. van suggerir que la protrusió ascendent o descendent de la NP pot tenir una gran influència en l'aparició i el desenvolupament de la MC12. Bobechko40 i Herzbein et al.41 van informar que la NP és un teixit immunotolerant que no pot entrar a la circulació vascular des del naixement. Les protuberàncies de les NP introdueixen cossos estranys al subministrament sanguini, mediant així les reaccions autoimmunes locals42. Les reaccions autoimmunes poden induir un gran nombre de factors immunitaris, i quan aquests factors estan exposats contínuament als teixits, poden causar canvis en la senyalització43. En aquest estudi, la sobreexpressió d'IL-4, IL-17 i IFN-γ són factors immunitaris típics, cosa que demostra encara més l'estreta relació entre la NP i les MC44. Aquest model animal imita bé la irrupció de les nanopartícules i l'entrada a la placa terminal. Aquest procés va revelar encara més l'impacte de l'autoimmunitat en la membrana medul·lar (MC).
Com s'esperava, aquest model animal ens proporciona una possible plataforma per estudiar la MC. Tanmateix, aquest model encara té algunes limitacions: en primer lloc, durant la fase d'observació dels animals, alguns conills en estadi intermedi necessiten ser sacrificats per a proves histològiques i de biologia molecular, de manera que alguns animals "deixen d'utilitzar-se" amb el temps. En segon lloc, tot i que en aquest estudi s'estableixen tres punts temporals, malauradament només hem modelat un tipus de MC (canvi de tipus Modic I), per la qual cosa no és suficient per representar el procés de desenvolupament de la malaltia humana, i cal establir més punts temporals per observar millor tots els canvis de senyal. En tercer lloc, els canvis en l'estructura del teixit es poden mostrar clarament mitjançant tinció histològica, però algunes tècniques especialitzades poden revelar millor els canvis microestructurals en aquest model. Per exemple, es va utilitzar microscòpia de llum polaritzada per analitzar la formació de fibrocartílag en discs intervertebrals de conill45. Els efectes a llarg termini de la NP sobre la MC i la placa terminal requereixen més estudis.
Cinquanta-quatre conills blancs mascles de Nova Zelanda (pes aproximadament de 2,5-3 kg, edat de 3-3,5 mesos) es van dividir aleatòriament en grup d'operació simulada, grup d'implantació muscular (grup ME) i grup d'implantació d'arrels nervioses (grup NPE). Tots els procediments experimentals van ser aprovats pel Comitè d'Ètica de l'Hospital de Tianjin, i els mètodes experimentals es van dur a terme en estricta conformitat amb les directrius aprovades.
S'han introduït algunes millores a la tècnica quirúrgica de S. Sobajima 46. Cada conill es va col·locar en decúbit lateral i es va exposar la superfície anterior de cinc discs intervertebrals lumbars (DIV) consecutius mitjançant un abordatge posterolateral retroperitoneal. A cada conill se li va administrar anestèsia general (uretà al 20%, 5 ml/kg a través de la vena de l'orella). Es va fer una incisió longitudinal de la pell des de la vora inferior de les costelles fins a la vora pèlvica, 2 cm ventralment als músculs paravertebrals. La columna vertebral anterolateral dreta, de L1 a L6, es va exposar mitjançant una dissecció afilada i roma del teixit subcutani, el teixit retroperitoneal i els músculs suprajacents (Fig. 6A). El nivell del disc es va determinar utilitzant la vora pèlvica com a punt de referència anatòmic per al nivell del disc L5-L6. Utilitzeu una agulla de punció de calibre 16 per perforar un forat prop de la placa final de la vèrtebra L5 a una profunditat de 3 mm (Fig. 6B). Utilitzeu una xeringa de 5 ml per aspirar el nucli pulpós autòleg del disc intervertebral L1-L2 (Fig. 6C). Retireu el nucli pulpós o el múscul segons les necessitats de cada grup. Després d'aprofundir el forat, es col·loquen sutures absorbibles a la fàscia profunda, la fàscia superficial i la pell, tenint cura de no danyar el teixit periostial del cos vertebral durant la cirurgia.
(A) El disc L5-L6 s'exposa mitjançant un abordatge retroperitoneal posterolateral. (B) Utilitzeu una agulla de calibre 16 per perforar un forat prop de la placa terminal L5. (C) Es recullen MF autòlegs.
Es va administrar anestèsia general amb uretà al 20% (5 ml/kg) per via auricular, i es van repetir radiografies de la columna lumbar a les 12, 16 i 20 setmanes després de la cirurgia.
Es van sacrificar conills mitjançant injecció intramuscular de ketamina (25,0 mg/kg) i pentobarbital sòdic intravenós (1,2 g/kg) a les 12, 16 i 20 setmanes després de la cirurgia. Es va extreure tota la columna vertebral per a l'anàlisi histològica i es va realitzar una anàlisi real. Es van utilitzar transcripció inversa quantitativa (RT-qPCR) i Western blotting per detectar canvis en els factors immunitaris.
Les ressonàncies magnètiques es van realitzar en conills utilitzant un imant clínic de 3.0 T (GE Medical Systems, Florence, SC) equipat amb un receptor de bobina ortogonal per a les extremitats. Els conills van ser anestesiats amb un 20% d'uretà (5 mL/kg) a través de la vena de l'orella i després es van col·locar en decúbit supí dins de l'imant amb la regió lumbar centrada en una bobina de superfície circular de 5 polzades de diàmetre (GE Medical Systems). Es van adquirir imatges de localitzador ponderades en T2 coronals (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) per definir la ubicació del disc lumbar de L3-L4 a L5-L6. Es van adquirir talls ponderats en T2 del pla sagital amb els següents paràmetres: seqüència d'eco de spin ràpid amb un temps de repetició (TR) de 2200 ms i un temps d'eco (TE) de 70 ms, matriu; camp visual de 260 i vuit estímuls; el gruix del tall era de 2 mm, la bretxa era de 0,2 mm.
Després de fer l'última fotografia i sacrificar l'últim conill, es van retirar els discs de simulació, incrustats en el múscul i de NP per a l'examen histològic. Els teixits es van fixar en formalina tamponada neutra al 10% durant 1 setmana, es van descalcificar amb àcid etilendiaminotetraacètic i es van seccionar en parafina. Els blocs de teixit es van incloure en parafina i es van tallar en seccions sagitals (5 μm de gruix) mitjançant un micròtom. Les seccions es van tenyir amb hematoxilina i eosina (H&E).
Després de recollir els discs intervertebrals dels conills de cada grup, es va extreure l'ARN total mitjançant una columna UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Xina) segons les instruccions del fabricant i un sistema de transcripció inversa ImProm II (Promega Inc., Madison, WI, EUA). Es va realitzar la transcripció inversa.
La RT-qPCR es va dur a terme utilitzant un Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., EUA) i SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA) segons les instruccions del fabricant. El volum de reacció de la PCR va ser de 20 μl i contenia 1,5 μl de cDNA diluït i 0,2 μM de cada encebador. Els encebadors van ser dissenyats per OligoPerfect Designer (Invitrogen, València, CA) i fabricats per Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Xina) (Taula 1). Es van utilitzar les següents condicions de cicle tèrmic: pas inicial d'activació de la polimerasa a 94 °C durant 2 min, després 40 cicles de 15 s cadascun a 94 °C per a la desnaturalització de la plantilla, recuit durant 1 minut a 60 °C, extensió i fluorescència. Les mesures es van realitzar durant 1 minut a 72 °C. Totes les mostres es van amplificar tres vegades i el valor mitjà es va utilitzar per a l'anàlisi RT-qPCR. Les dades d'amplificació es van analitzar mitjançant FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, EUA). L'expressió gènica d'IL-4, IL-17 i IFN-γ es va normalitzar respecte al control endogen (ACTB). Els nivells d'expressió relatius de l'ARNm diana es van calcular mitjançant el mètode 2-ΔΔCT.
La proteïna total es va extreure dels teixits mitjançant un homogeneïtzador de teixits en tampó de lisi RIPA (que conté un còctel inhibidor de proteasa i fosfatasa) i després es va centrifugar a 13.000 rpm durant 20 min a 4 °C per eliminar les restes de teixit. Es van carregar cinquanta micrograms de proteïna per carril, es van separar mitjançant SDS-PAGE al 10% i després es van transferir a una membrana de PVDF. El bloqueig es va realitzar en llet desnatada en pols al 5% en solució salina tamponada amb Tris (TBS) que contenia Tween 20 al 0,1% durant 1 h a temperatura ambient. La membrana es va incubar amb un anticòs primari de conill anti-decorina (diluït 1:200; Boster, Wuhan, Xina) (diluït 1:200; Bioss, Pequín, Xina) durant la nit a 4 °C i es va fer reaccionar el segon dia; amb anticòs secundari (immunoglobulina G de cabra anti-conill a una dilució d'1:40.000) combinat amb peroxidasa de rave picant (Boster, Wuhan, Xina) durant 1 hora a temperatura ambient. Els senyals de Western blot es van detectar mitjançant un augment de la quimioluminescència a la membrana quimioluminescent després de la irradiació amb raigs X. Per a l'anàlisi densitometrica, es van escanejar i quantificar els blots mitjançant el programari BandScan i els resultats es van expressar com la relació entre la immunoreactivitat del gen diana i la immunoreactivitat de la tubulina.
Els càlculs estadístics es van dur a terme utilitzant el paquet de programari SPSS16.0 (SPSS, EUA). Les dades recollides durant l'estudi es van expressar com a mitjana ± desviació estàndard (mitjana ± SD) i es van analitzar mitjançant una anàlisi de la variància de mesures repetides unidireccional (ANOVA) per determinar les diferències entre els dos grups. Un valor de P < 0,05 es va considerar estadísticament significatiu.
Així doncs, l'establiment d'un model animal de MC mitjançant la implantació de nanopartícules autòlogues al cos vertebral i la realització d'observació macroanatòmica, anàlisi de ressonància magnètica, avaluació histològica i anàlisi de biologia molecular pot esdevenir una eina important per avaluar i comprendre els mecanismes de la MC humana i desenvolupar noves intervencions terapèutiques.
Com citar aquest article: Han, C. et al. Es va establir un model animal de canvis de Modic implantant el nucli pulpos autòleg a l'os subcondral de la columna lumbar. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J. i Boos, N. Ressonància magnètica de la columna lumbar: prevalença d'hèrnia i retenció de disc, compressió de l'arrel nerviosa, anomalies de la placa terminal i osteoartritis de l'articulació facetària en voluntaris asimptomàtics. rate. Radiology 209, 661–666, doi:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, i Leboeuf-Eed, K. Canvis mòdics i la seva relació amb les troballes clíniques. European Spine Journal: publicació oficial de l'European Spine Society, l'European Society of Spinal Deformity i l'European Society for Cervical Spine Research 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., et al. Canvis mòdics a les plaques terminals de les vertebrals lumbars: prevalença i associació amb dolor lumbar i ciàtica en treballadors masculins de mitjana edat. Spine 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., i Dalinka, M. Ressonància magnètica dels canvis de medul·la òssia prop de la placa terminal en la malaltia degenerativa de la columna lumbar. AJR. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ i Carter, JR Malaltia degenerativa del disc: avaluació dels canvis de la medul·la vertebral amb ressonància magnètica. Radiology 166, 193–199, doi:10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS i Carter, JR. Imatges de la malaltia degenerativa del disc. Radiology 168, 177–186, doi: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Els predictors de la placa terminal neovertebral (Modic) indiquen canvis en la població general. European Spine Journal: Publicació oficial de la European Spine Society, la European Society of Spinal Deformity i la European Society for Cervical Spine Research, Divisió 19, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB i Mannisch, K. Canvis mòdics després d'una hèrnia discal lumbar. European Spine Journal: Publicació oficial de la European Spine Society, la European Society of Spinal Deformity i la European Society for Cervical Spine Research 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., i Kaapa, E. Els canvis de tipus I de Modic poden predir una degeneració discal deformacional ràpidament progressiva: un estudi prospectiu d'1 any. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ i Fan, SW Canvis mòdics: possibles causes i contribució a la degeneració del disc lumbar. Medical Hypothesises 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Ruptura interna de disc. Problemes de prolapse discal al llarg de 50 anys. Spine (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).
Data de publicació: 13 de desembre de 2024